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碱性磷酸酶怎么检测

2022-02-05

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一、比色法

①0.1mol/L碳酸盐缓冲液(pH10.0):称取无水碳酸钠6.36g,碳酸氢钠3.36g,4-氨基安替比林1.5g,溶于800ml蒸馏水中,移入1000ml容量瓶内,加蒸馏水至刻度,置棕色瓶内保存。

②20mmol/L磷酸苯二钠溶液:称取磷酸苯二钠(AR)2.18g,迅速加入已煮沸的500ml蒸馏水中,冷却后加入氯仿2ml防腐,冰箱保存。此为基质液。

③铁氰化钾溶液:称取铁氰化钾2.5g,硼酸17g,分别溶于400ml蒸馏水中,混合后加水至1000ml,置棕色瓶内避光保存。出现蓝绿色应弃去。

④酚标准贮存液(1mg/ml):称取重蒸馏酚1.0g,溶于0.1mol/L盐酸中,并加至1000ml刻度。也可购买标准液。

⑤酚标准应用液(0.05mg/ml):取酚标准贮存液5ml,加蒸馏水至100ml。

二、连续监测法

①1.8mol/L AMP缓冲液(pH10.3):称取2-氨基-2甲基-1-丙醇(AMP,MW89.14)160g,加1mol/L盐酸320ml混合,加500ml新煮沸已凉的蒸馏水,调pH至10.3±0.02(30℃),并加上述蒸馏水至1000ml,置紧塞瓶中于冰箱保存。

②10.5mmol/L氯化镁溶液:称取氯化镁(MgCl2·6H2O,MW20 3.31)0.21g,溶于水中,并稀释至100ml,室温保存。

③31.5mmol/L磷酸对硝基苯酚溶液(4-NPP):称磷酸对硝基苯酚二钠盐(含6分子水,MW 371.15)120.8mg,溶于100ml蒸馏水中,置棕色瓶内于冰箱保存。

④底物缓冲液(0.84mol/L AMP,15mmol/L 4-NPP,0.5mmol/L MgCl2,pH10.3)将AMP、4-NPP和MgCl23种溶液按10∶10∶1混合,37℃预温待用。

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